Вся электронная библиотека      Поиск по сайту

 

Виноградский. МИКРОБИОЛОГИЯ ПОЧВЫ

АЗОТОБАКТЕР

 

С.Н. Виноградский

С.Н. Виноградский

 

Смотрите также:

 

Биография Виноградского

 

Микробиология

 

Почва и почвообразование

 

Почвоведение. Типы почв

 

растения

 

Геоботаника

 

 Биографии биологов, почвоведов

Биографии почвоведов

 

Эволюция

 

Биология

 

Эволюция биосферы

 

Геология

геология

Основы геологии

 

Геолог Ферсман

 

Геохимия - химия земли

 

Гидрогеохимия. Химия воды

 

Минералогия

минералы

 

Химия почвы

 

Круговорот атомов в природе

 

Книги Докучаева

докучаев

 

Происхождение жизни

 

Вернадский. Биосфера

биосфера

 

МЕТОД С ПРИМЕНЕНИЕМ БЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ

 

Если дело касается лишь учета количества азотобактера в почве или проверки его способности к фиксации азота, то маннит и сахар почти так же хороши, а иногда и лучше, чем всякий другой энергетический материал. Но они непригодны, когда необходимо прямое и быстрое выделение микроорганизма в чистом виде для опытов биохимического характера, о которых будет речь. Как известно, на сахаре или манните азотобактер никогда не дает чистого роста, в силу чего в этом случае всегда необходимы повторные пересевы и перевивки культур. Применение микроманипулятора к такому смешанному материалу не помогает избавиться от загрязнений. Поэтому, если рекомендуется избегать коллекционных культур, то прямое выделение из почвы может быть успешным лишь при применении наиболее элективной среды. Автор считает наиболее подходящими для этого соли бензойной кислоты.

 

Для указанных целей употребляется бензойнокислый натрий или кальций, свободный от солей салициловой кислоты и один или два раза пере- Тгристаллизованный. Применяют следующие количества солей: бензойнокислого натрия 0,1 г на 30 мл кремнекисло1 о геля в чашках Петри, диаметром 10 см, и 0,5 г той же соли на 150—200 мл геля в чашках Петри, диаметром 20 см. Для бензойнокислого кальция дозировки меньше: 0,05 г и 0,3 г на пластинки геля такого же размера.

 

Дальнейшие подробности относительно приготовления пластиной даны в другом месте [9].

 

Пластинки заражают очень небольшими количествами почвы из образца, заведомо содержащего азотобактер, путем распыления частиц почвы по всей поверхности пластинки при помощи тигля Гуча. Если необходимо знать точный вес использованной почвы, то тигель Гуча взвешивается до и после посева. Вес употребленной почвы не должен превышать одной или нескольких сотых грамма.

 

Ясно различимые колонии азотобактера появляются на второй день инкубации при 30°. Тотчас же исследованные под микроскопом, они оказываются состоящими из клеток азотобактера большей и меньшей величины. Большинство колоний совершенно чистые, другие содержат единичные палочки. После того как выбраны лучшие колонии, они должны быть тотчас же перевиты, чтобы избавиться от амеб, которые в противном случае, размножаясь, уничтожат культуру.

 

Иногда, для того чтобы иметь материал для пересевов под рукой, а также с целью экономии пластинок, можно засеять жидкую питательную среду. Ее состав сходен с раствором, применяемым для пропитывания пластинок из кремнекислого геля, а именно:

Бензойнокислого кальция, мл        10 = 0,3 г соли

Питательного раствора солей, мл  10

Раствора гуматов, мл                                   10

Водопроводной воды, мл    170

15 мл такого раствора в колбе Эрленмейера, емкостью в 125 мл, образуют слой жидкости в несколько миллиметров толщиной.

 

Для опытов с азотфиксацией и для других экспериментов используют чистые колонии, выросшие вокруг почвенных частиц. Из клзток их составляющих, делают взвесь в стерильной водопроводной воде и выливают ее на пластинки из кремнекислого геля в количестве, достаточном для того, чтобы смочить нею ее поверхность. Если необходимы контрольные пластинки, то на них наливается такое же количество взвеси, и они сейчас же обрабатываются парами хлороформа в закрытом помещении. Такой способ заражения всей поверхности пластинки имеет преимущество, давая возможность сокращать срок выдерживания пластинки, который не должен превышать 96 часов.

 

Развитие азотобактера на пластинках с бензойной кислотой происходит регулярно и в высшей степени характерно. Вначале слегка мутные колонии с возрастом становятся непрозрачными и темными и через 3 или 4 дня принимают шоколадно-бурую окраску, в то время как весь гель становится дымчато-черным.

 

Эти черты особенно резко выражены, если на пластинке развивается лишь немного колоний, так как, если пластцнка, пропитанная бензойно- кислым натрием, полностью покрыта слизью азотобактера, то гель становится слегка разжиженным вследствие щелочности среды.

 

Под микроскопом в течение первого и второго дня колонии состоят из продолговатых клеток, соединенных попарно или в короткие цепочки; на третий день преобладают круглые клетки, на четвертый видны лишь круглые потемневшие и инкапсулированные формы, которые представляют собой покоящуюся стадию развития азотобактера. Получается общее впечатление, что развитие происходит правильно и нормально. Инволюционные формы, частые в культурах с сахарами, никогда не встречаются.

 

Для производства химических анализов пластинки высушиваются после того как на гель наливается 2 мл Nj 10 соляной кислоты, чтобы избежать потери аммиака. Для перегонки по Кьельдалю кусочки высушенного геля переносят в колбу Кьельдаля, а чашки Петри ополаскивают минимальным количеством воды, пользуясь при этом стеклянной палочкой с каучуковой насадкой.

 

Азотфиксация на исследуемой среде была доказана как макрометодом, так и микрометодом Кьельдаля. Последний, конечно, предпочтительнее, особенно при условии применения перегонного прибора Вагнера, как это рекомендует Прегль. Но иногда в этом случае возникают затруднения, а именно, когда для сжигания сухого геля требуется большая вместимость колбы, чем объем колб, обычно употребляемых при применении микрометода Кьельдаля. Тогда пользуются колбами для макрометода Кьельдаля, продукт сжигания доводится дистиллированной водой до 100 мл и взятые отсюда 20-миллилитровые порции жидкости перегоняются.

 

Средняя цифра всех сделанных определений равна 11 мг азота, фиксированного на 1 г анионов бензойной кислоты, т. е. немного больше, чем в случае культур, проведенных на манните или глюкозе, когда эта цифра в идентичных условиях часто меньше 10 мг.

Подводя итог, автор считает, что применение бензойной кислоты дает возможность оперировать с азотобактером, взятым прямо из почвы, и с большей гарантией, чем в случае коллекционных культур, так как это будет чистый и подлинный азотобактер.

 

Конечно, в культурах, выделенных таким способом, могут быть смешаны несколько рас азотобактера вследствие чего необходима последующая их обработка, если хотят выделить какой-либо специальный штамм. В последнем случае лучше всего прибегнуть к микроманипулятору. Если же иногда возражают, что проще воспользоваться готовыми штаммами азотобактера, этикетированными как chroococcum, agilis, vinelandii и т. д., чем производить свежие выделения его из почвы, то автор считает, что этикетки далеко- не всегда соответствуют характеристике выделенного вида и что тщательная проверка сделанного определения часто является нелегкой задачей.

 

 

 

К содержанию книги: Сергей Николаевич ВИНОГРАДСКИЙ - МИКРОБИОЛОГИЯ ПОЧВЫ. ПРОБЛЕМЫ И МЕТОДЫ

 

 

Последние добавления:

 

Ферсман. Химия Земли и Космоса

 

Перельман. Биокосные системы Земли

 

БИОЛОГИЯ ПОЧВ

 

Вильямс. Травопольная система земледелия

 

История русского почвоведения

 

Качинский - Жизнь и свойства почвы

 

Вернадский - ЖИВОЕ ВЕЩЕСТВО