Вся электронная библиотека      Поиск по сайту

 

Виноградский. МИКРОБИОЛОГИЯ ПОЧВЫ

АЗОТОБАКТЕР

 

С.Н. Виноградский

С.Н. Виноградский

 

Смотрите также:

 

Биография Виноградского

 

Микробиология

 

Почва и почвообразование

 

Почвоведение. Типы почв

 

растения

 

Геоботаника

 

 Биографии биологов, почвоведов

Биографии почвоведов

 

Эволюция

 

Биология

 

Эволюция биосферы

 

Геология

геология

Основы геологии

 

Геолог Ферсман

 

Геохимия - химия земли

 

Гидрогеохимия. Химия воды

 

Минералогия

минералы

 

Химия почвы

 

Круговорот атомов в природе

 

Книги Докучаева

докучаев

 

Происхождение жизни

 

Вернадский. Биосфера

биосфера

 

МЕТОДИКА

 

Необходимо ли, чтобы культура, которой пользуются для морфологических исследований, была выделена для этих целей из одной клетки? Мы этого не думаем, так как в этом случае речь идет не о том, чтобы проследить расщепление биотипа, а о его развитии, включая сюда наблюдения над свойственными ему индивидуальными отклонениями. Если прибегать к этой трудной методике с целью гарантировать себе безусловную чистоту изучаемого штамма, то этого можно достигнуть гораздо проще.

 

Наиболее надежным доказательством чистоты культуры является однородность последней на всех последовательных стадиях ее развития, как мы это видим на наших фотографиях. И если, хотя и редко, но все же возможно, чтобы два самостоятельных вида на какой-нибудь стадии своего развития оказались морфологически идентичными, то во всяком случае это неизбежно нарушилось бы в ходе их дальнейших превращений. Таким образом, однородность культуры служит наиболее верным признаком ее чистоты, и получение культуры из одной клетки еще не освобождает экспериментатора от обязательства достигнуть такой однородности, тем более что при изолировании одной клетки азотобактера чрезвычайно трудно избежать тех мельчайших загрязнений, которыми так часто изобилуют культуры этого микроба. Поэтому эта методика не всегда может считаться вполне надежной.

 

Что касается микроскопического изучения клеток азотобактера, то Красильников, де Регель и Бачинская следили за развитием живых клеток микроба в висячей капле. Эта методика несомненно точна, но она в данном случае себя не оправдывает. Прежде всего, она дает неполное представление о культуре в целом, тогда как это последнее особенно важно; затем развитие клеток в висячей капле затруднено, наблюдение очень сложно, оптические условия неблагоприятны, а структурные детали без применения окрашивания не могут считаться достоверными. Мало того, иллюстрации в виде зарисовок не могут иметь документальной ценности.

 

Поэтому мы предпочитали следить за ходом развития культур, с самого начала и до конца, в колбах или на чашках Петри, производя наблюдения с такими промежутками времени, как это было необходимо. Этот простой прием является в то же время наиболее показательным, конечно, при условии безусловной чистоты культуры. Само собой разумеется, что подобные серийные просмотры должны делаться не случайно через неопределенные сроки, а по выработанной схеме, позволяющей уловить все последовательные стадии развития клеток.

 

Для облегчения этой задачи достаточно установить, как это обычно делается, характерные признаки молодых, зрелых, старых клеток азотобактера и покоящихся форм, если они имеются. Несколько предварительных наблюдений помогут выработать наиболее целесообразную схему дальнейших исследований. Ввиду того, что развитие азотобактера идет гораздо медленнее, чем у громадного большинства бактерий, его культуры должны просматриваться не более одного раза в день, часто же можно ограничиться тремя-четырьмя просмотрами в течение десяти дней.

 

Труднее всего уловить начало развития азотобактера, так как его наиболее молодые формы часто очень кратковременны. В колбах, сохраняющихся неподвижно, такое начало развития сопровождается появлением легкой опалесценции, которую нетрудно заметить.

 

Микроскопические препараты

 

Как только будет замечена в колбах опалесценция, что чаще всего происходит через, 20— 24 часа после заражения, приступают к наблюдению за подвижностью клеток в висячей капле и приготовляют первые препараты. Берут петлю жидкости и помещают ее в центре покровного стекла; получается выпуклая капля около 5 мм в диаметре; каплю высушивают, красят образовавшийся налет солей, который вырисовывается в центре стекла, и рассматривают в воде. На препарате, сделанном в это время, уже можно найти достаточное количество клеток, по которым можно судить о признаках, свойственных молодым формам азотобактера. В дальнейшем пользуются тем же самым приемом с той разницей, что при последующих пробах, когда культуры сильнее разовьются, не приходится больше считаться с недостатком количества клеток.

 

Общепринятые методы окрашивания не дают хороших результатов. Препарат часто получается нечетким, перекрашенным, с грязным фоном из-за слизи, обильной в известные периоды развития микроба, а также лз-за осадка солей. Вследствие этого детали структуры ускользают от наблюдения. Мы прибегли к методике, уже применявшейся нами ранее и состоящей из попеременной обработки препарата двумя красками — кислой с прибавлением фенола и основной,—обе в слабых растворах. Первой выбранной на этот раз краской является рекомендованный Ромеллем 1%-ный виоламин в 5%-ной карболовой воде. Ее красящая способность слабая, она действует скорее как протрава, так как слабый водный раствор генциана, примененный вслед за ней, после промывания препарата в роде дает в этом случае наиболее быстрое и яркое окрашивание. Продолжительность окрашивания каждой краской 30 секунд. Если надо покрасить старую культуру азотобактера, в которой можно предполагать наличие цист, то препарат держат в капле виоламина, подогревая ее до появления паров. После этого препарат промывают, красят в течение одной минуты раствором везувина, снова промывают и, наконец, быстро обрабатывают водным генцианом (что делает все тона более яркими), остерегаясь передержать препарат в краске. Если препарат получается удачным, то центральное тело цисты и клетка микроба окрашиваются в бурый или черный тон, в капсуле же обнаруживаются два слоя, из которых наружный — черноватый, а внутренний — желтый.

 

Метод быстрый, а фотографии, сделанные с таких препаратов, отличаются яркостью красок и чистотой фона.

 

Следует отметить одну важную подробность: нельзя помещать препараты в канадский бальзам. Клетки при этом сморщиваются и общая картина от этого в большей или меньшей степени страдает. После просмотра покровные стекла снимают, высушивают, завертывают в бумагу, этике- тируют и сохраняют в маленьких коробках. Их можно снова просматривать так часто, как это понадобится, в капле BOJJJJ. Картина при этом сохраняет всю свою «свежесть». Фотографии точно так же были сняты в в* де; в этих случаях покровное стекло окружали канадским бальзамом, как рамкой. Жанте не находил в этом никакого неудобства.

 

 

 

К содержанию книги: Сергей Николаевич ВИНОГРАДСКИЙ - МИКРОБИОЛОГИЯ ПОЧВЫ. ПРОБЛЕМЫ И МЕТОДЫ

 

 

Последние добавления:

 

Ферсман. Химия Земли и Космоса

 

Перельман. Биокосные системы Земли

 

БИОЛОГИЯ ПОЧВ

 

Вильямс. Травопольная система земледелия

 

История русского почвоведения

 

Качинский - Жизнь и свойства почвы

 

Вернадский - ЖИВОЕ ВЕЩЕСТВО