АЗОТОБАКТЕР

С.Н. Виноградский

Смотрите также:

Биография Виноградского

Микробиология

Почва и почвообразование

Почвоведение. Типы почв

Геоботаника

 Биографии биологов, почвоведов

Эволюция

Биология

Эволюция биосферы

Геология

Основы геологии

Геолог Ферсман

Геохимия - химия земли

Гидрогеохимия. Химия воды

Минералогия

Химия почвы

Круговорот атомов в природе

Книги Докучаева

Происхождение жизни

Вернадский. Биосфера

Рецепты питательных сред

Для культур в жидкой среде пользуются раствором минеральных солей, к которому прибавляют одно из пяти уже упомянутых выше питательных веществ — спиртов или солей органических кислот.

Большинство наших исследований было проведено с жидкими культурами. Для этой цели удобно было пользоваться плоскодонными коническими колбами объемом в 125 см3 и диаметром от 7 до 8 см. При внесении в колбы 30 см3 питательного раствора, слой жидкости достигал 1 см в высоту, что было необходимо для того, чтобы заметить начинающееся помутнение. В колбу вносили около 0,1 г углекислого кальция, который покрывал дно, причем раствор оставался совершенно прозрачным, если его не взбалтывать.

Чтобы культуры можно было сравнить между собой, их выращивали в строго одинаковых условиях, за исключением различия в отношении вносимого энергетического вещества. Приготовляют серию из семи колб, которые одновременно заражают одинаковым количеством культуры того штамма азотобактера, который изучают; две добавочные колбы — одна с глюкозой, другая с маннитом — служат контролем. Нет никакой необходимости работать с эквимолекулярными растворами, так как небольшая разница в концентрациях не может оказать никакого влияния на развивающиеся клетки. Достаточно придерживаться слабых концентраций, так как, с одной стороны, питательная доза для спиртов и солей бензойной кислоты близка к токсичной, с другой — таким путем лучше воспроизводятся естественные условия, где, как правило, мы встречаемся с разбавленными растворами. Поэтому следует не превышать концентраций в 0,2—0,3%, т. е. таких, которые в десять раз слабее рекомендуемых в рецептах стандартных сред.

Приводим список питательных растворов для полной серии опытов. На 30 мл солевого раствора, к которому прибавлено 0,1 г СаС03, берут:

1.         От 0,1 до 0,2 мл абсолютного этилового спирта

2.         0,1 мл спирта нормального бутилового

3.         100 мг маслянокислого кальция

4.         100 мг уксуснокислого кальция

5.         От 70 до 80 мг бензойнокислого кальция

6.         100 мг глюкозы чистой

7.         100 мг маннита чистого

Спирты прибавляются после стерилизации колб в автоклаве при помощи прецизионной пипетки Прегля.

Для культивирования на твердых средах гораздо лучше применять пластинки из кремнекислого геля, чем агаровые. При этом пользуются чашками Петри из стекла Пирекс; в зависимости от надобности берут чашки, диаметром в 5—10—20 см, и наполняют их 10—30—200 см3 соответствующей смеси; непосредственно перед употреблением пластинки кремнекислого геля промывают в горячей воде в течение одной минуты. Для их пропитывания берут раствор солей в пять раз крепче, чем приведенный выше. В соответствии с величиной пластинок вносят на каждую 0,5; 2,0 или 10 см3 такого раствора. Раствор разливают по маленьким колбочкам, прибавляя в них в случае надобности стерильной воды, вносят выбранное питательное вещество, разбалтывают немного углекислого кальция, кипятят, выливают на пластинки и выпаривают жидкость, помещая чашки Петри на металлическую пластинку, нагреваемую до 50°. Спирты прибавляют после такого выпаривания, внося их по каплям на поверхность пластинки из кремнекислого геля; после этого чашку Петри закрывают и дают спирту проникнуть в толщу геля. Минут через десять после этой операций поверхность пластинки снова становится матовой. Соответствующие дозы этилового спирта будут: 0,05; 0,2—0,3, 2,0 мл.

Агаровая среда, как более крепкая, рекомендуется специально для очищения культур. В этом случае пользуются раствором солей, прибавляя к нему около 2% агара, вымоченного в течение нескольких дней в воде. Раньше чем разливать агар по 10-сантиметровым чашкам Петри, в них лиосят соответствующие порции питательных веществ в растворе, а также несколько капель стерилизованного известкового молока. Для приготовления пластинок из спиртового агара наливают на дно чашки Петри 0,2 мл абсолютного спирта, немного разболтанного в воде мела л смешивают с расплавленным агаром.

Заметим, что для заражения пластинок кремнекислого геля, вместо размазывания капли посевного матерртала стеклянным шпателем, согнутым под прямым углом, лучше пользоваться пульверизатором, при помощи которого на поверхность пластинок направляется тонкая распыленная струя. Таким способом клетки азотобактера распределяются по поверхности пластинок более равномерно, в то время как растирание шпателем может повести к их слипанию. Применяя описанную методику, можно работать с меньшими предосторожностями, чем обычно, так как зародыши микробов -из воздуха не могут развиваться на безазотистых средах, в которые прибавлено лишь небольшое количество спирта в качестве единственного органического вещества.

К содержанию книги: Сергей Николаевич ВИНОГРАДСКИЙ - МИКРОБИОЛОГИЯ ПОЧВЫ. ПРОБЛЕМЫ И МЕТОДЫ