Вся электронная библиотека >>>

 Микробиология молочного производства   >>>

  

 

Микробиологические основы молочного производства


Раздел: Производство

   

Глава 14 МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО УЧЕТА МИКРООРГАНИЗМОВ. МЕТОД НЕПОСРЕДСТВЕННОГО ПОДСЧЕТА КЛЕТОК

  

С помощью микроскопа в препарате из анализируемого субстрата подсчитывают количество видимых клеток, как мертвых, так и живых, Этот метод простой, позволяет быстро получить результаты, а следовательно, оценить исследуемый образец. Недостатком метода является-невозможность отличить живые'клетки от мертвых; нельзя полулить микробы в виде культур и исследовать их свойства; следовательно, при непосредственном подсчете невозможно осуществлять качественное исследование микроорганизмов.

Существует несколько вариантов метода непосредственного подсчета микробов под, микроскопом. При некоторых из них, например подсчете в камера, учитывают клетки непосредственно в жидкости; в других, например методе Брида, Дрейера — Королева, -микроскопируют высушенный, фиксированный и окрашенный препарат. Имеется также вариант (м'етод микрокультур), представляющий как бы сочетание метода непосредственного подсчета микробов с методом культивирования.

Подсчет клеток в счетной камере. Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло, в середине которого находится плоское углубление; расстояние от его дна до нижней поверхности покровного стекла, плотно наложенного па края впадины, равно 0,1 мм. В центре -дна счетной камеры нанесена квадратная сетка общей площадью 1 мм2, состоящая из 400 квадратиков (20X20). При величине элементарного квадратика 1/х мм2, толщине слоя (глу

|на камеры) 0,1 мл объем каждого столбика жидкости, располо?нного на элементарном квадратике, равен 'Доd мм3, или Г4000000 мл.

Небольшую каплю исследуемой жидкости, предварительно тша1ьно взболтанной, вносят петлей в центр камеры и покрывают кровным стеклом, с которым капля должна соприкасаться верх|й поверхностью. Покровное стекло слегка нажимают возЛё краеп I немного передвигают до тех пор, пока не будет достигнуто полное вприкоснопение. Камеру устанавливают на столик микроскопа, освляют на несколько минут в покое, пока все клетки не осядут на o, и устанавливают систему микроскопа так, чтобы было вадно [четливое изображение основной сетки камеры и исследуемых кле(дрожжей или бактерий).

Подсчитав количество клеток в нескольких квадратиках, нахо|т среднее число клеток для одного квадратика. Если в среднем один квадратик приходится 2 клетки, то в 1 мл будет находиться 1-106=8-106 клеток. Метод Брнда. Точно калиброванной пипеткой 0,01 мл исследуежндкости помещают на предметное стекло и равномерно расселяют профламбированной иглой на площади 1 см2. Мазок высушивают, обезжиривают, фиксируют и окрашивают. Для одновременного обезжиривания, фиксирования и окрашншя препарата рекомендуется следующий состаз раствора: спирт :олютный) — 50 мл, хлороформ — 50, ледяная уксусная кисло— 20 мл, фуксин основной — 0,1 г, метилановый голубой — 1,0 г. Спирт предварительно обезвоживают желатином. Краски рас[оряют в смеси спирта и хлороформа, нагретой до 50°С. После ох!ждения до комнатной температуры в раствор добавляют ледяную кусную кислоту.

Препарат готовят обычным способом и высушивают на воздухе подогрева и фиксации на пламени. Затем его обезжиривают, спругот и окрашивают, дважды погружая в указанный выше' рас(первый раз на 5 с, второй — на 10 с). Бактериальные клетки !шпваются в синевато-голубой цвет и четко -выделяются на о-розовом фоне. Клетки подсчитывают, пользуясь иммерсиопобъективом, в определенном количестве типичных полей зрения тем вычисления определяют среднее количество бактерий в од|поле зрения.

Для подсчета бактерий в 1 мл среднее количество-бактерии в зрения микроскопа умножают на коэффициент 10000/3.14 (z-2). _/с поля зрения (г) определяют путем измерения диаметра поля |пя. Коэффициент остается постоянным до тех пор, пока не из|тся объектив, положение тубуса и окуляр микроскопа. 1ри непосредственном подсчете бактерий под микроскопом регаты будут несколько завышенными но сравнению с чашечным рдом, так как учитывают и живые, и мертвые клетки. В то же [я простота и доступность этого метода для практического прикшя, а такке быстрота получения результатов делают этот метод |ым и весьма перспективным, количество клеток в прозрачных питательных средах можно опiflb с помощью ФЭКа. Для этого строят калибровочную кривую, Ькающую зависимость между количеством клеток в среде и мутio среды. При определении содержания микроорганизмов в среде авялвается мутность на ФЭКе, а затеи по калибровочной кри)ассчитыв'ают число микроорганизмов в образце.

 

СОДЕРЖАНИЕ:  ТЕХНОЛОГИЯ И ТЕХНИКА ПРОМЫШЛЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА ЦЕЛЬНОМОЛОЧНЫХ И МОЛОЧНОКОНСЕРВНЫХ

ПРОДУКТОВ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ МОЛОЧНОГО ПРОИЗВОДСТВА

 

Смотрите также:

 

Сооружения для биологической очистки сточных вод...

Метод биологической очистки сточных вод основан на способности
от загрязнений, а метаболизм этих загрязнении в клетках микроорганизмов обеспечивает их
Количественная оценка организмов в иле производится путем подсчета числа...

 

ВИРУСЫ — ...к жизнедеятельности вне живых клеток....

С начала 50-х гг. вирусологи начали широко использовать метод культуры клеток.
Если такие клетки заразить В., то можно непосредственно наблюдать их разрушительное действие на клетки.

 

СТЕРИЛИЗАЦИЯ КОНСЕРВОВ и продуктов

Для выбранных режимов устанавливается предельно допустимое количество микроорганизмов на 1 см3 или 1 г продукта.
С учетом всех изложенных выше факторов и применяя разработанные методы, устанавливается режим или формула...

 

Очищение организма от патогенных микроорганизмов

Токсоплазма - простейший микроорганизм, относящийся к классу жгутиковых.
Клетки (несмотря на их количество и разнообразие)
Комбинирование всех трех методов вместе: голод на урине, с питьем отвара полыни, в течение 1-7 и более суток.

 

МЕТОДЫ КОНСЕРВИРОВАНИЯ. Тепловое воздействие...

Сущность этого метода в том, что гибель микробных клеток в этих условиях наступает в результате коагуляции белков протоплазмы.
Оно зависит от температуры обработки, вида микроорганизмов и их количества, химического состава продукта.