Вся электронная библиотека >>>

 Микробиология молочного производства   >>>

  

 

Микробиологические основы молочного производства


Раздел: Производство

   

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНТЕРОКОККОВ

  

Для учета энтерококков в исследуемых объектах используют посев на плотные или жидкие питательные среды. Прямой посев на элективные питательные среды с последующим подсчетом выросших .колоний рекомендуется проводить при исследовании продуктов с относительно высоким содержанием энтерококков. (сырое молоко, творог и творожные изделия). Результаты на плотных питательных средах учитывают через 24—48 ч инкубации при 37°С.

При небольшом обсеменении продуктов энтерококками {молоко пoQлe пастеризатора, пастеризованное молоко) рекомендуется проводить посев в жидкую среду накопления. Этот посев предусматривает два этапа: посев в среду накопления, подтверждающий тест.

Определение с использованием плотных питательных сред. Готовят десятикратные разведения исследуемого продукта в соответствии со стандартным методом.

В качестве питательных сред. используют среду Пейкера. (Packer) или молочную срёду с полимиксином по Г. П. Калине.

Расплавленные и охлажденные до 45—48°С питательные среды разливают тонким слоем в чашки Петри. После застывания чашки со средой используют для посевов или хранят в холодильнике в -течение 7—10 дней. Из исследуемых разведений в зависимости от цели исследования (при определении энтерококков как санитарнопоказательных высевают I—IV разведения продукта; при пищевых отравлениях — IV—VII разведения) берут по 0,1 мл и высевают на подсушенную поверхность питательной среды Пейкера или Г. П. Калины. Высеянный материал тщательно втирают шпателем в поверхность сред. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 48 ч.

Типичные колонии энтерококков имеют округлую форму, ровные края, блестящую поверхность, диаметр 1;5—2 мм и фиолетовую, окраску .да коричнево-красном фойе среды Пейкера или красную с зоной протеолиза на светло-голубом фоне среды Г. П. Калины. Подсчитывают все типичные колонии, и число их пересчитывают на 1 г или 1 мл продукта. 3—5 колояий отсевают на скошенный агар для дальнейшей идентификации; посевы культивируют при температуре 37°С в течение 24 ч.

Из колоний, выросших на скошенном агаре, готовят мазки и окрашивают их по Граму. Одновременно определяют их каталазную активность. Для этого на очищенное обезжиренное стекло наносят каплю 1,%-ного водного раствора Н2О2 и в нем растирают петлю культуры. Если пузырьки газа не выделяются, значит, реакция отрицательная. Грамположительные каталазоотрицательные диплококки изучают по шести тестам Шермана: температурные границы роста от 10 до 45°С; рост при 6,5% NaCl; рост при рН 9,6; рост в желчи или 40%-ном желчном бульоне; рост в молоке с 0,1%-ным метиленовым голубым; терморезистентность (выдерживают при температуре 60°С в течение 30 мин).

Для ускорения дифференциации культуры можно высеять только иа бульон, содержащий 40% желчи и имеющий рН 9,6. Одновременно для ридовой дифференциации .культуры высевают на среды, содержащие теллурит калия, 2, 3, 5-ТТХ, .кровь, молоко, сорбит, маннит и раффинозу. Если штаммы были сняты с молочно-полимиксинового агара, то для видовой дифференциации их высевают на те же среды, за исключением сред, содержащих молоко и 2, 3, 5-ТТХ, так как эти ингредиенты входят в пропись среды выделения. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 24 ч ( 39).

Определение с использосанием жидких питательных сред. Гото вят десятикратные разведения в соответствии со стандартным методом. В качестве питательных сред применяют щелочно-полимиксиновую среду (ЩЭС), желчно-нитратную среду, среду Эндо с кристаллическим фиолетовым и полимиксином (см.  147).

При небольшом обсеменении молочных продуктов энтерококками 1 мл продукта и соответствующих разведений засевают в пробирки со средой ЩЭС. Посевы инкубируют при температуре 37°С в течение 24—48 ч. Из каждой засеянной пробирки петлей пересевают на чашки Петри с подсушенной желчно-цитратной средой или средой Эндо с кристаллическим фиолетовым и полимикснном. Посевы выдерживают при температуре 37°С в течение 24 ч.

Типичные колонии энтерококков на желчно-цитратной среде круглые, с ровными краями, диаметром 1,5—2,0 мм, розово-красного цвета, а на среде Эндо. с кристаллическим фиолетовым и полимикснном.— ярко-красного. При наличии типичных колоний энтерококков на чашках Петри определяют титр, в котором обнаружены энтерококки в исследуемом продукте.

Для ускоренной дифференциации S. faecalis может использоваться сорбитный агар. К 1 л мясопептонного агара добавляют 10 г сорбита и 600 мг индикатора конго-красного, предварительно растворенных в 5—7 мл дистиллированной воды (добавляемые компоненты растворяют отдельно при нагревании,, но не доводя до. кипения), хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри.  Среда имеет интенсивно-красную окраску.

Наличие энтерококков в посевном материале учитывается через 16—18 ч роста при температуре 37°С. Точечные колонии S. faccalis и его вариантов имеют черную окраску, вырастая на поверхности обесцвеченной вокруг них среды. S. faecium и S. faecium var. durans, не ферментирующие сорбит, образуют бесцветные точечные колонии без изменения цвета среды ( 40).

 

СОДЕРЖАНИЕ:  ТЕХНОЛОГИЯ И ТЕХНИКА ПРОМЫШЛЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА ЦЕЛЬНОМОЛОЧНЫХ И МОЛОЧНОКОНСЕРВНЫХ

ПРОДУКТОВ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ МОЛОЧНОГО ПРОИЗВОДСТВА

 

Смотрите также:

 

Микрофлора пищеварительного тракта

Вегетарианская диета способствует увеличению количества энтерококков и эубактерий.

 

ПИЕЛОНЕФРИТ — диффузное воспаление паренхимы...

Флора чаще смешанная, обычно присутствуют энтерококки и стафилококки.
(определение количества форменных элементов в 1 мл мочи; в норме число...

 

Внутренние болезни и их лечение. ЗАБОЛЕВАНИЯ...

Возбудители -- энтерококк, протей, стафилококки, стрептококки, кишечная палочка и др., которые попадают в.

 

Осложнения лекарственной терапии и методы...

Устойчивые к антибиотикам микробы (стафилококки, палочки протея, энтерококки, синегнойная палочка и др...